ELISA原理

ELISA利用抗原抗體之間專一性結(jié)合之特性，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)；由于結(jié)合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設(shè)計(jì) 其結(jié)合 機(jī)制後，配合酵素顯色反應(yīng)，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進(jìn)行定量分析。根據(jù)待測(cè)樣品與結(jié)合機(jī)制的不同，ELISA可設(shè)計(jì)出各種不 同類型的檢測(cè)方式，主要以"三明治法"(sandwich)、"間接法"(indirect)、以及"競(jìng)爭(zhēng)法"(Competitive)三種為主，以下 為各種方法之介紹。

ELISA分類

見(jiàn)ELISA的雙抗夾心法原理；

ELISA的雙抗夾心法，又稱"三明治法"。

三明治法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般之操作步驟為：

將具有專一性之抗體固著(coating)于塑料孔盤上，完成後洗去多馀抗體；

加入待測(cè)標(biāo)本，標(biāo)本中若含有待測(cè)之抗原，則其會(huì)與塑料孔盤上的抗體進(jìn)行專一性結(jié)合；

洗去多馀待測(cè)標(biāo)本，加入標(biāo)記有酵素之二次抗體，與抗原結(jié)合；

洗去多馀未結(jié)合的二次抗體，加入酵素受體使呈色，以肉眼或儀器讀取顯色結(jié)果。

三明治法分別以兩種抗體對(duì)標(biāo)本中的抗原進(jìn)行兩次專一性辨認(rèn)，因此專一性相當(dāng)高，但此待測(cè)抗原必須是多價(jià)抗原，如此才可獲得兩種以上的專一性抗體，以分別進(jìn)行夾心；而且此法需要足夠的表位空間以進(jìn)行抗原抗體的夾心，所以并不適用于半抗原或小分子抗原等分子量較小之標(biāo)的。

ELISA雙抗夾心法的衍生方法如ABC法：ELISA的生物素 -親和素系統(tǒng)，該產(chǎn)品系列是檢測(cè)方法上的重要革命。生物素/親和素系統(tǒng)用于ELISA一般有三種形式，即橋聯(lián)法（BAB）、標(biāo)記法 （BA）和ABC法，不少學(xué)者用之檢測(cè)了不同的抗原—抗體系統(tǒng)均取得了較好的結(jié)果，其中以BA法和ABC法應(yīng)用較多，敏感性一般比常規(guī)ELISA法高 4～80倍。

ELISA的間接法：

間接法常用于檢測(cè)抗體，一般之操作步驟為：

將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成後洗去多馀之抗原；

加入待測(cè)標(biāo)本，標(biāo)本中若含有待測(cè)之一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性結(jié)合；

洗去多馀待測(cè)標(biāo)本，加入帶有酵素之二次抗體，與待測(cè)之一次抗體結(jié)合；

洗去多馀未結(jié)合的二次抗體，加入酵素受體使酵素顯色，以肉眼或儀器讀取顯色結(jié)果。

ELISA的競(jìng)爭(zhēng)法原理；

競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，其操作步驟為：

將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成後洗去多馀抗體；

加入待測(cè)標(biāo)本，使標(biāo)本中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性結(jié)合；

加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性結(jié)合，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)標(biāo)本中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可結(jié)合的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體結(jié)合，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。

洗去標(biāo)本與帶有酵素之抗原，加入酵素受體使酵素顯色，當(dāng)標(biāo)本中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下的帶有酵素的抗原越少，顏色也就越淺。

當(dāng)需要檢測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著在塑膠孔盤上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。