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技術(shù)文章

Technical articles

2015
10-22

恒遠(yuǎn)技術(shù)講解:ELISA空白孔顯現(xiàn)陽性的原因
近日，上海大學(xué)金老師實驗后來電向我司咨詢ELISA空白孔為什么顯現(xiàn)陽性？金老師的實驗流程大致是：包被放置一晚4攝氏度12小時-一抗65分鐘-二抗45分鐘-顯色15分鐘“-"表示洗板，洗五次，每次3min。空白孔為不包被，加一抗和二抗，結(jié)果空白孔比陽性值還高。通過了解我司技術(shù)人員經(jīng)過詳細(xì)分析后給出以下幾種可能：1.手工洗板嗎，臨近空白孔的標(biāo)準(zhǔn)品濃度zui高，有可能甩液體的時候沒注意，標(biāo)準(zhǔn)孔的倒流到空白孔去了哦！2.如果沒有封閉，有可能是未經(jīng)過封閉的板子對一抗有吸附作用，吸附一抗...
2015
10-21

ELISA加樣時移液槍的正確使用方法
大家經(jīng)常會討論移液的問題，這個步驟在ELISA實驗中的卻是比較重要的。在加樣品和加顯色液的時候是定量的，產(chǎn)生氣泡可能會對實驗結(jié)果影響蠻大的。總之，掌握微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點是可以幫助您在實驗中避免不必要的麻煩。1.加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。2.試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加...
2015
10-14

實驗必知:ELISA試劑盒實驗條件的選擇
在ELISA試劑盒實驗中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之...
2015
10-9

實驗新手如何獨立看懂ELISA實驗結(jié)果
ELISA測定按其表示測定結(jié)果的方式分為定性和定量測定兩大類。定性測定只是對標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出“有”或“無”的結(jié)論，分別用“陽性”和“陰性”來表示。可見定性測定通常是用于傳染性病原體的抗原或抗體的測定，以判斷特定病原體感染的存在與否。而定量測定則是對標(biāo)本中待測抗原的多少進(jìn)行量值測定，以具體數(shù)值表示。定量測定基本上是用于非病原體抗原物質(zhì)的測定，如激素、細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)志物、小分子藥物等。FP，hCG、細(xì)胞因子等的定量測定。ELISA定性測定的“陰性”和“陽性”的判...
2015
9-29

科研試劑使用注意事項
試劑是試驗、研究開發(fā)方面*的化學(xué)物質(zhì)。但有些試劑會因操作有誤而引起意想不到的事故。這樣的試劑大體可分為具有引發(fā)火災(zāi)，爆炸的危險性;因裸露而對人體產(chǎn)生傷害的有害特性;以及保管中因自然分解而引發(fā)意想不到的事故的危險性。當(dāng)然，有些試劑同時具有多種危險特性。因此，在使用時必須注意安全，從開封，保管，直到廢棄，希望實施責(zé)任制管理。要認(rèn)識到所有的試劑都具有“不被人知的危險有害性”，防止化學(xué)事故發(fā)生。●購買后，請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項。●做好預(yù)防顛倒，摔壞的措施和管理體制。●在使用前再次...
2015
9-24

未使用完的96孔板試劑盒該作何處理
ELISA試劑盒包裝規(guī)格的大小取決于試劑盒里面酶標(biāo)板的規(guī)格大小，常見的有96T(12孔乘以8條)跟48T（12孔乘以4條）兩種。所以當(dāng)您在選擇ELISA試劑盒的時候考慮自己樣本的收集量再做選擇，以免造成浪費。也許您會想剩余沒用完的板可以再保存等下次實驗重新使用。我司技術(shù)卻不贊同該做法，不僅僅是因為回收的板子對后面實驗會造成比較大的誤差。所以選購ELISA是應(yīng)該考慮另外兩個問題：一、經(jīng)濟(jì)：一塊96孔板，進(jìn)口的也貴不到哪去，國產(chǎn)的更便宜，你重復(fù)利用，這么一折騰，時間，精力以及洗板...
2015
9-22

如何降低ELISA試劑盒背景因素的影響
我司吳近日整理了一些相關(guān)ELISA試劑盒實驗技術(shù)，今天就說說降低ELISA試劑盒背景因素的影響建議。科研人員來說ELISA實驗的原理和操作步驟并不陌生，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，操作過程中夾雜著洗滌和封閉步驟。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果操作不合理，也會很大程度上影響實驗的準(zhǔn)確度。實驗結(jié)束時我們是否能獲得有意義而且準(zhǔn)確的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比，背景噪音會在很大程度上影響科研人員對結(jié)果的判斷。關(guān)于如何在實驗過程中降低ELISA試劑盒背景因素...
2015
9-16

ELISA常見問題：如何確定樣本的稀釋倍數(shù)
ELISA檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中zui為靈敏的技術(shù)手段。可是在新老手操作過程中總是會出現(xiàn)或大或小的問題，常見問題有：1.同一個試劑盒，每次檢測樣品時，均需要帶標(biāo)準(zhǔn)品嗎？能否節(jié)約？２.如何確定樣本的稀釋倍數(shù)？3.使用標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液來稀釋嗎？我司資深技術(shù)統(tǒng)一做出如下答復(fù)：1:嚴(yán)格意義上，每次檢測樣品都要帶標(biāo)準(zhǔn)品，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。原因是每次檢測都要受不同條件的影響，比如人為操作，環(huán)境的變化等。2：不能節(jié)約，建議您盡量把樣本同時檢測3：一般來說，ELISA是不需要稀釋...

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